弓形桿菌屬通用pcr檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)使用方法：
一、樣品 dna 的制備
1. 用自選方法純化樣品的 dna，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
2. 如果有 n 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 n+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。如果用本試劑盒自帶的dna 釋放劑試用裝。則按下面步驟操作：
3. 配制溶液 a 工作液。以配制 1ml 工作液（足夠 10 個(gè)樣品）為例：在一干凈塑料管中加入 10ul 溶液 a 成分一，20ul 溶液 a 成分二和 970ul 超純水，充分混合均勻即可。溶液 a 工作液可室溫放置，但*在一周內(nèi)用完，不要*放置。一次檢測(cè)一個(gè)樣品需要 100ul 溶液 a 工作液，1ml 工作液足夠 10 個(gè)樣品。如果待測(cè)樣品數(shù)量為其他數(shù)字，配制的溶液 a 工作液的體積需要做相應(yīng)的調(diào)整。
4. 在標(biāo)記好的 n+2 個(gè)離心管中，加入 1-5mg 固體樣品（半粒芝麻大?。┗?5ul 液體樣品待測(cè)樣品。在樣品制備陽(yáng)性對(duì)照中加入 5ul 陽(yáng)性對(duì)照，在樣品制備陰性對(duì)照中加入 5ul 水。
5. 在每個(gè)管中加入 100 ul 溶液 a 工作液，確保固體樣品被溶液淹埋，如果是液體樣品則震蕩混勻。
6. 95℃保溫 10 分鐘。
7. 待冷卻到常溫后加入 10ul 溶液 b 并混勻得 dna 釋放液。每個(gè)樣品得到的 dna釋放液足夠進(jìn)行 50-100 次 pcr。
二、弓形桿菌屬通用pcr試劑盒 設(shè)置 pcr 反應(yīng)（40 ul 體系）
8. 在 n+2 個(gè) pcr 管中加入下列成分，下面以樣品數(shù)為 1 舉例（注意：如果*次使用dna 釋放劑，*每個(gè)樣品設(shè)置兩個(gè)模板用量的 pcr 反應(yīng)，兩個(gè)反應(yīng)的模板使用量差 10 倍，由此確定*用量，以后就用效果*的那個(gè)模板用量）：
成份
樣品（用量1）
樣品（用量2）
陽(yáng)性對(duì)照
陰性對(duì)照
即用型 pcr mix 3.0
20 ul
20 ul
20 ul
20 ul
源性 pcr 引物混合液
2 ul
2 ul
2 ul
2 ul
制備的樣品
18 ul
2 ul
無(wú)
無(wú)
樣品制備陽(yáng)性對(duì)照
不加
不加
2 ul
不加
樣品制備陰性對(duì)照
不加
不加
不加
2 ul
超純水
不加
16 ul
16 ul
16 ul
9. 輕柔混勻后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 pcr。
過程
溫度
時(shí)間
預(yù)變性
94℃
10分鐘
pcr 反應(yīng)
（35 個(gè)循環(huán)）
94℃
30s
60℃
30s
72℃
30s
延伸
72℃
7分
10. 電泳檢測(cè) pcr 產(chǎn)物。預(yù)期的 pcr 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 216bp。陽(yáng)性對(duì)照必須有此條帶出
現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，需要用通用引物（如真核生物專一 pcr 引物，需自備）測(cè)試是否有抑制劑或樣品是否濃度達(dá)到 pcr 的要求，如果通用引物也擴(kuò)不出來(lái)，需要濃縮并再次純化 dna 樣品，或者更換 dna 提取方法，直到通用引物能夠擴(kuò)增出預(yù)計(jì)大小的片段。