酶免疫技術(shù)的發(fā)展
酶免疫測定具有高度敏感性、特異性,而且它的試劑比較穩(wěn)定,操作簡單且無放射性危害,特別是商品試劑盒和自動(dòng)化儀器的應(yīng)用,使其成為一種適用于各級(jí)檢驗(yàn)部門的免疫標(biāo)記技術(shù)。隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展,酶免疫測定的方法、技術(shù)也得到發(fā)展和更新,斑點(diǎn)-elisa、發(fā)光酶免疫測定、免疫印跡法、bas-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等方法不斷得到應(yīng)用。
(一)斑點(diǎn)-elisa
斑點(diǎn)-elisa的原理與elisa的區(qū)別在于用對(duì)蛋白質(zhì)有*吸附力的硝酸纖維素膜代替塑料制品作為固相載體,酶作用底物后在硝酸纖維素膜上形成有色沉淀而使膜著色。它的靈敏度較一般elisa高6~8倍、可達(dá)ng水平,試劑用量小,不需其它設(shè)備條件。
(二)免疫印跡法
免疫印跡法是將電泳與elisa結(jié)合起來的一種方法。它先經(jīng)十二烷基磺酸鈉-聚苯烯酰胺凝膠電泳將樣品進(jìn)行分離,通過轉(zhuǎn)印將被分離的各區(qū)帶原位轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上,然后把印有蛋白質(zhì)條帶的膜當(dāng)成包被抗原的固相載體,做酶免疫測定。所以它的方法分為電泳、轉(zhuǎn)印、酶免疫測定三個(gè)階段。免疫印跡法結(jié)合了電泳的高分辨率和酶免疫測定的高敏感性和特異性,是一種能用于分析樣品組分的免疫學(xué)測定方法。
(三)發(fā)光酶免疫測定
發(fā)光酶免疫測定與一般eia的區(qū)別是酶所催化的底物是發(fā)光劑。產(chǎn)物不是一般eia的有色物質(zhì),而是發(fā)光產(chǎn)物,所發(fā)出的光可用特定的儀器測定。常用的酶是hrp和ap,hrp的發(fā)光底物有魯米諾及衍生物、對(duì)-羥基苯乙酸;ap的底物為3-(2--螺旋金剛烷)-4-甲氧基-(3-磷酸氧基)-苯基-1,2-二氧乙烷和4-甲基傘形酮磷酸鹽。
(四)bas-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
bas-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是將生物素-親和素(bas)放大系統(tǒng)與elisa結(jié)合起來的一種技術(shù)。生物素(b)是一種小分子的生長因子,有兩個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu),其中一個(gè)可以和親和素結(jié)合,另一個(gè)可以和包括酶、抗原(抗體)的多種物質(zhì)結(jié)合。親和素(a)又稱卵白素,有4個(gè)亞基,都可與生物素穩(wěn)定結(jié)合,此為放大系統(tǒng)的關(guān)鍵,即有1個(gè)親和素就能結(jié)合4個(gè)生物素,親和素也可被酶標(biāo)記。