蛋白純化是指通過基因工程技術(shù)將編碼蛋白的核酸序列導(dǎo)入到宿主細(xì)胞,使其大量表達(dá),再使用適當(dāng)?shù)募兓椒▽⑵湓隗w外純化出來,從而獲得高純度、活性和產(chǎn)量的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)可以分為原核表達(dá)系統(tǒng)和真核表達(dá)系統(tǒng)兩大類。那么你知道蛋白質(zhì)純化的原理是什么嗎?讓我們一起來看看吧!
一、乳糖操縱子的負(fù)調(diào)控
在沒有乳糖存在時,lac操縱子處于阻遏狀態(tài),此時,i序列表達(dá)lac阻遏蛋白與o序列結(jié)合,阻礙rna聚合酶與p序列結(jié)合,抑制轉(zhuǎn)錄啟動。當(dāng)有乳糖存在時,乳糖進入細(xì)胞,經(jīng)β-半乳糖苷酶催化,轉(zhuǎn)變?yōu)楫惾樘?,異乳糖結(jié)合阻遏蛋白,使蛋白構(gòu)象變化,導(dǎo)致阻遏蛋白與o序列解離,從而啟動轉(zhuǎn)錄。
異丙基硫代半乳糖苷(iptg)的作用與異乳糖相同,是一種作用ji強的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實驗室廣泛應(yīng)用。
二、宿主菌株的選擇
(1)bl21是zui常用于原核表達(dá)的菌株之一,主要適用于非毒性蛋白的表達(dá),具有大腸桿菌聚合酶,故可適用于tac或trc等使用大腸桿菌rna聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)(如:pgex,pmal質(zhì)粒)。
(2)bl21(de3)在bl21菌株的染色體上整合了λ噬菌體de3區(qū)的t7噬菌體rna聚合酶基因,可同時表達(dá)t7 rna聚合酶和大腸桿菌rna聚合酶,可用于pet系列,pgex,pmal等質(zhì)粒的表達(dá)。
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