flycut™ 酶是一系列能夠快速消化dna的工程限制性酶。所有flycut™酶在通用cutone中顯示出優(yōu)異的活性™ 和cutone™ 彩色緩沖液，能夠在5~15分鐘內(nèi)消化dna。這使得任何限制性酶的組合都能在一個(gè)反應(yīng)管中同時(shí)工作，并消除了連續(xù)消化的需要。flycut™ 酶已通過(guò)多項(xiàng)嚴(yán)格的質(zhì)量控制，可用于消化質(zhì)粒、基因組和病毒dna以及pcr產(chǎn)物。cutone™color buffer包括密度試劑以及紅色和黃色跟蹤染料，可以將反應(yīng)混合物直接裝載在凝膠上。cutone的紅色染料™ 彩色緩沖液在1%瓊脂糖凝膠中與2.5kb雙鏈dna片段一起遷移，黃色染料在1%瓊脂凝膠中與10bp雙鏈dna碎片一起遷移。
艾美捷快速內(nèi)切酶ecori：
cat #: c-bsm536
size: 600 rxns
storage: -20°c
快速內(nèi)切酶ecori組分：
推薦反應(yīng)條件
1x cutone“”緩沖器；在37°c下培養(yǎng)；有關(guān)反應(yīng)設(shè)置，請(qǐng)參閱“快速dna消化方案”。
熱滅活
在80°c下培養(yǎng)20分鐘。
質(zhì)量控制
功能測(cè)試
在含有1μgλdna和1μl flycut’ecori的cutone“緩沖液中，在37°c下孵育15分鐘，20μl反應(yīng)可通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳確定完-全消化。
長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)/星形活性測(cè)定
在含有1μgλdna和1μl flycut“ecori的cutone”緩沖液中，在37℃下孵育3小時(shí)，反應(yīng)20μl，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)到dna模式?jīng)]有可檢測(cè)的核酸酶降解。長(zhǎng)期孵育可能導(dǎo)致星形活性。
結(jié)扎和清算
用flycut’“ecorl在37℃下消化10倍后，在22℃下可將>95%的dna片段與t4 dna連接物連接。瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定，在這些連接的片段中，>95%的片段可用flycut”ecori重切。
非特異性核酸內(nèi)切酶活性
在含有1μg超螺旋質(zhì)粒和1μl flycut’’ecori的cutone“緩沖液中，在37℃下孵育4小時(shí)，20μl反應(yīng)可使瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定的刻痕或線性化形式的轉(zhuǎn)化率<10%。
藍(lán)/白篩選試驗(yàn)：
用1μl flycut消化含有l(wèi)aczα基因的合適載體™ecori。將消化產(chǎn)物連接并轉(zhuǎn)化為大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞。在含有x-gal、iptg和適當(dāng)抗生素的luria bertani培養(yǎng)板上，成功連接的β-半乳糖苷酶基因可以表達(dá)并產(chǎn)生藍(lán)色菌落，而中斷基因（即降解的dna末端）產(chǎn)生白色菌落。flycut™ 限制性內(nèi)切酶必須產(chǎn)生少于1%的白色菌落。
在推薦的反應(yīng)條件下，該酶可在5~15分鐘內(nèi)消化單位底物。酶的最適反應(yīng)溫度為37°c。
當(dāng)?shù)孜飀na被cpg甲基化酶甲基化時(shí)，這種限制性酶的切割可能被阻斷或受損。
當(dāng)?shù)孜飀na被ecobi甲基化酶甲基化時(shí)，這種限制性酶的切割可能被阻斷或受損。
該酶在80°c下保溫20分鐘即可熱滅活，保溫3小時(shí)不顯示星形活性，但保溫時(shí)間較長(zhǎng)可能會(huì)產(chǎn)生星形活性。