在生物體內(nèi)，蛋白的翻譯后修飾過(guò)程是蛋白發(fā)揮各種不 同生化功能的基礎(chǔ)，這些翻譯后修飾包括糖基化、氧化、 甲基化和磷酸化等。作為生物藥物的蛋白在生產(chǎn)、運(yùn)輸、 保存過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生變體，從而影響到藥物的活性和穩(wěn)定 性。因此蛋白的肽譜經(jīng)常被用來(lái)研究蛋白的翻譯后修飾 過(guò)程以及蛋白變體的存在。同時(shí)也用于生物制藥行業(yè)蛋 白產(chǎn)品初級(jí)結(jié)構(gòu)的確認(rèn) [1-3] ，從而更好地控制生化藥品的 質(zhì)量和確保病人的用藥安全。
本文采用*酶解蛋白的方法，得到各種蛋白的肽 譜，比較幾款不同的反相色譜柱在分離蛋白酶解片斷時(shí) 的差異，同時(shí)借助質(zhì)譜，評(píng)價(jià)蛋白酶解產(chǎn)物 - 多肽在酸性 或者堿性流動(dòng)相條件下表現(xiàn)出分離性能的差異。
儀器配置 thermo ultimate 3000 系統(tǒng)：泵：dgp-3600rs；自動(dòng)進(jìn)樣器： wps-3000trs；柱溫箱：tcc-3000rs；檢測(cè)器：dad-3000rs 質(zhì)譜：tsq vantage 色譜軟件：chromeleon 6.8
測(cè)試條件 與紫外檢測(cè)器兼容的液相色譜條件 色譜柱： 1- acclaim 120 c18, 3mm×150mm, 3µm (p/n063691, s/n001119)； 2-acclaim 120 c8, 2.1mm×100mm, 3µm (p/n059123, s/n001337)； 3-hypersil gold c4, 2.1mm×150mm, 1.9µm (s/ n1008512×7, lot10603)； 流動(dòng)相： 95% 超純水 +5% 乙腈 +0.1%tfa：5% 超純水 +95% 乙腈 +0.08%tfa, 梯度洗脫：
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