elisa試劑盒變質(zhì)是elisa實(shí)驗(yàn)中比較常見的問題，那么，elisa試劑盒變質(zhì)的一些原因現(xiàn)為大家詳細(xì)分析下。
1、試劑因素
不同批次的elisa試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量*一致，即使是通過批批檢的項(xiàng)目其檢測結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購長批號的試劑，并保證保存條件。 嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。
2、樣本因素
標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌mei等，后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。
3、操作因素
elisa操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。
4、方法學(xué)的影響
elisa測定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、igm抗體捕捉法、競爭抑制法，其中競爭抑制法(hbeab,hbcab等采用)因受操作時(shí)差所引起的bu公平競爭等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。
5、灰區(qū)的設(shè)置
通常情況下，elisa定性實(shí)驗(yàn)以“陽性和“陰性來報(bào)告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值(cut-off value，co值)，這是定性免疫測定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。
6、標(biāo)本復(fù)查
elisa手工檢測過程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法，比如對hbsag、hbeag、hcv-ab、hiv-ab、tp-ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽性標(biāo)本及少見模式的檢測結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。
7、常表示結(jié)果的常用方法
⑴.定性測定。
⑵.半定量測定 結(jié)果一般以滴度表示。
⑶.定量測定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行elisa測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示。在elisa定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。