特性
提純方法
原理
優(yōu)缺點(diǎn)
密度
超速離心/差速離心（uc）
樣本與雜質(zhì)的密度差異
缺點(diǎn)：耗時(shí)長(zhǎng)，回收率低，重復(fù)性差，純度低
優(yōu)點(diǎn)：操作規(guī)范，難度低，適用性廣
密度梯度離心
使用不同密度的分離介質(zhì)
缺點(diǎn)：耗時(shí)長(zhǎng)，操作繁瑣，回收率低
優(yōu)點(diǎn)：外泌體純度高
尺寸
尺寸排阻色譜
（sec）
基于分子大小差異，與超濾濃縮相結(jié)合。
缺點(diǎn)：樣本經(jīng)過(guò)流動(dòng)相會(huì)被稀釋
優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、大規(guī)模、純度高
功能
免疫親和法
基于抗原-抗體特異性反應(yīng)
缺點(diǎn)：耗時(shí)，成本高，要求高，外泌體的異質(zhì)性影響
優(yōu)點(diǎn)：特異性，純度高，能分離出特定的外泌體亞類(lèi)
聚合物沉淀法
聚合物降低外泌體溶解度
缺點(diǎn)：純度極低，外泌體易受污染
優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便快捷、可處理大樣本量，易于多方法結(jié)合使用
磷酯酰絲氨酸（ps）親和法
外泌體磷酸基團(tuán)與金屬氧化物特異性結(jié)合
缺點(diǎn)：不適合大樣本分離，可能有雜質(zhì)
優(yōu)點(diǎn)：使用方便，純度高，形態(tài)完整，耗時(shí)短
微流控
多種方法整合
缺點(diǎn):門(mén)檻較高，只適合小樣本分離
優(yōu)點(diǎn)：高效方便，純度高，污染風(fēng)險(xiǎn)小，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化診斷
外泌體的純化方法多種多樣，為不同的研究提供相應(yīng)的需求，加上還有新的提純方法在開(kāi)發(fā)當(dāng)中，未來(lái)將會(huì)有更多的選擇。那么問(wèn)題隨之而來(lái)，我們應(yīng)該用什么手段來(lái)量化不同方法的優(yōu)劣呢？下面我們將利用瑞芯智造（深圳）科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的納米庫(kù)爾特粒度儀（nanocoulter）測(cè)試的不同純化方法的數(shù)據(jù)對(duì)比來(lái)說(shuō)明問(wèn)題。
將相同的外泌體樣品通過(guò)四種不同的提純手段進(jìn)行純化，然后再用納米庫(kù)爾特粒度儀進(jìn)行測(cè)試， 將不同提純方法的數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，從最終提純樣品的粒徑均一性和濃度高低來(lái)判斷其純化程度和樣品的損失量，由此比較不同方法的優(yōu)劣。下圖為用納米庫(kù)爾特粒度儀測(cè)試的a、b、c、d四種純化方法提純的外泌體樣品的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，可以看出利用不同方法純化后的外泌體樣品粒徑和濃度分布都表現(xiàn)出不小的差異。
圖1：納米庫(kù)爾特粒度儀（瑞芯智造）測(cè)試外泌體粒徑、濃度分布圖
下面我們將用納米庫(kù)爾特粒度儀測(cè)試的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，并將其整合到一起進(jìn)行繪圖，這樣能夠更為清晰的分辨這幾種純化方法的區(qū)別。
圖2：納米庫(kù)爾特粒度儀（瑞芯智造）測(cè)試外泌體粒徑、濃度對(duì)比圖
從上面這張圖我們可以直觀的看出a、b、c、d四種不同的提純方法所表現(xiàn)出的明顯差異，a明顯優(yōu)于其他三種，提純的外泌體不但粒徑均一，且濃度也更高；b與a較為接近，與之相比粒徑分布略寬，濃度略低；c與d的樣品損失量過(guò)高，c損失尤為嚴(yán)重，粒徑分布均一性也不是很好，是最差的。
瑞芯智造的納米庫(kù)爾特粒度儀從粒徑和濃度的視角對(duì)不同的外泌體純化方法進(jìn)行區(qū)分，以最直接的測(cè)量方式得到準(zhǔn)確的結(jié)果，而這需要很高的測(cè)量精度，不然不足以體現(xiàn)出其細(xì)微的區(qū)別，其應(yīng)用電阻感應(yīng)脈沖法（rps）作為底層原理，該原理已有半個(gè)世紀(jì)的發(fā)展歷史，又稱(chēng)電阻感應(yīng)脈沖法，電解質(zhì)溶液中的顆粒通過(guò)納米孔時(shí)，在恒電流設(shè)計(jì)的電路中，導(dǎo)致電極間電阻產(chǎn)生瞬時(shí)變化從而產(chǎn)生電脈沖，電脈沖幅度與粒徑成正比。作為電學(xué)檢測(cè)原理方法，rps 不同于光學(xué)檢測(cè)方法,如動(dòng)態(tài)光散射(dls)、納米粒子示蹤(nta)、納米流式，與樣本光學(xué)性質(zhì)無(wú)關(guān)。納米庫(kù)爾特粒度儀可在單顆粒水平實(shí)現(xiàn)納米顆粒的多參數(shù)表征，粒徑測(cè)量精度可媲美電鏡，3-5min就可精準(zhǔn)得到樣品完整，真實(shí)的粒徑分布。對(duì)促進(jìn)外泌體的研發(fā)生產(chǎn)具有重要作用。