人血管緊張素1(angiotensin 1)elisa試劑盒
(用于血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))
一、原理：
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 abc-elisa法。用抗人 angiotensin 1 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 angiotensin 1與單抗結(jié)合，加入*化的抗人angiotensin 1，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的streptavidin與*結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，后加終止液硫酸，在450nm處測(cè)od值，angiotensin 1濃度與od值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)求出標(biāo)本中angiotensin 1濃度。
二、試劑盒組成（2-8℃保存）
酶標(biāo)板（coated wells）
96孔
酶標(biāo)抗體工作液（enzyme conjugate）
12ml
10×標(biāo)本稀釋液（sample buffer）
12ml
20×濃縮洗滌液（wash buffer）
50ml
標(biāo)準(zhǔn)品（standards）：250ng/ml
1瓶
底物工作液（tmb solution）
12ml
抗體工作液（biotinylated antibody）
6ml
終止液（stop solution）
12ml
三、準(zhǔn)備試劑與收集血樣：
10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。收集標(biāo)本：血清、血漿（edta、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復(fù)凍融。標(biāo)準(zhǔn)品液配制：取8個(gè)1.5ml離心管，管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在管中加入250ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋?zhuān)瑥牡谄吖苤形?00ul棄去。第八管為空白對(duì)照。洗滌液：用重蒸水1:20稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）四、檢測(cè)程序：
加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃40分鐘。洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。每孔加入蒸餾水和抗體工作液各50ul(空白除外)。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃20分鐘。洗板：同前。每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃10分鐘。洗板：同前。每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。每孔加入100ul終止液混勻。30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。五、結(jié)果計(jì)算與判斷：
所有od值建議減除空白值后再行計(jì)算。如空白o(hù)d低于0.1，也可以直接計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品25、12.5、6.25、3.12、1.56、0.78、0.39、0 ng/ml為橫坐標(biāo)，od值為縱坐標(biāo)，使用軟件作圖，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。根據(jù)樣品od值計(jì)算出相應(yīng)angiotensin 1含量即可。軟件可以向本公司郵件索取。六、試劑盒性能：
靈敏度：小的angiotensin 1 檢測(cè)濃度小于0.2ng/ml。特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人angiotensin 1。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于9.6％。?七、注意事項(xiàng)：
1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
2. 洗滌過(guò)程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及od值錯(cuò)誤地升高。
3. 檢測(cè)時(shí)所有試劑都要恢復(fù)到室溫。板條開(kāi)封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。
4. 試劑盒使用超敏tmb溶液，若顯色過(guò)深會(huì)出現(xiàn)絮狀物，屬正常現(xiàn)象，不影響結(jié)果判讀。
5. 說(shuō)明書(shū)中試劑盒組成為96t的量，48t的量應(yīng)減半！
6. 本試劑盒宜置4oc冰箱保存。僅用于科研，不能用于臨床診斷！